以下是?大鼠胃蛋白酶(PP)ELISA試劑盒?的規(guī)范操作流程及關(guān)鍵注意事項：

　　BS-3164 大鼠胃蛋白酶(Pepsin)ELISA試劑盒

　　一、試劑準(zhǔn)備與樣本處理?

　　試劑平衡?：使用前將所有試劑室溫平衡20分鐘，避免劇烈震蕩產(chǎn)生泡沫影響加樣精度。

　　標(biāo)準(zhǔn)品配制?：凍干標(biāo)準(zhǔn)品需用樣品稀釋液復(fù)溶(如100ng/mL起始濃度)，靜置10分鐘后混勻，再梯度稀釋為50ng/mL、25ng/mL等系列濃度。

　　樣本處理?：

　　血清/血漿?：采集后需3000×g離心20分鐘(血清)或15分鐘(血漿)分離上清，避免溶血或反復(fù)凍融。

　　組織勻漿?：用預(yù)冷PBS按1:9(重量:體積)勻漿，5000×g離心10分鐘取上清。

　　二、操作步驟?

　　加樣?：

　　空白孔不加樣，標(biāo)準(zhǔn)孔加50μL梯度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加50μL(1:1稀釋后樣本)。

　　建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本做復(fù)孔以減少誤差。

　　孵育與洗滌?：

　　加入50μL生物素標(biāo)記抗體，37℃孵育60分鐘，甩干液體后用洗滌液(含0.05%吐溫-20)洗板5次(手工洗板需拍干)。

　　洗板機(jī)洗滌時可增加1次洗滌次數(shù)。

　　顯色與終止?：

　　每孔加入底物A/B各50μL，37℃避光顯色15分鐘，立即加入50μL終止液。

　　三、結(jié)果判讀?

　　使用酶標(biāo)儀在450nm波長下讀取OD值，15分鐘內(nèi)完成檢測。

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，計算樣本濃度。

　　四、注意事項?

　　加樣精度?：使用校準(zhǔn)后的加樣器，避免交叉污染(一孔一吸頭)。

　　溫育控制?：

　　推薦水浴溫育以減少“邊緣效應(yīng)"。

　　顯色階段嚴(yán)格避光(TMB底物需避金屬器械接觸)。

　　保存條件?：未用板條需密封防潮，2-8℃保存;試劑開封后避免反復(fù)凍融。

　　五、性能參數(shù)?

　　靈敏度?：通常≤1.56ng/mL。

　　重復(fù)性?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<15%。

　　如需具體品牌差異說明或問題排查，可進(jìn)一步補(bǔ)充需求。

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