人8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒檢測原理、操作步驟

　　以下是關(guān)于人8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒的實驗說明書，結(jié)合檢測原理、操作步驟及注意事項進行詳細說明：

　　一、?檢測原理?

　　采用?雙抗體夾心法?或?競爭法?(不同品牌可能差異)：

　　夾心法?：包被抗體捕獲樣本中的8-OHdG，再與酶標(biāo)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，通過底物顯色(TMB)測定吸光度(OD值)，濃度與顏色深度正相關(guān)?。

　　競爭法?：樣本中的8-OHdG與生物素標(biāo)記抗原競爭結(jié)合固相抗體，OD值與濃度負相關(guān)?。

　　二、?試劑盒組成?

　　組分? ?說明?

　　預(yù)包被微孔板? 12孔×8條，含抗8-OHdG抗體?。

　　標(biāo)準(zhǔn)品? 濃度梯度(如0-4000pg/ml或0-200ng/L)，需按說明書稀釋?。

　　酶標(biāo)試劑/檢測抗體? HRP標(biāo)記抗體，避光保存?。

　　洗滌液? 30倍濃縮，需稀釋后使用?。

　　顯色液(TMB)? A液(H?O?)與B液(TMB)需等體積混合?。

　　終止液? 2N H?SO?，顯色后終止反應(yīng)?。

　　三、?樣本處理要求?

　　血清/血漿?：離心(3000rpm, 10分鐘)去除顆粒，避免溶血或反復(fù)凍融?。

　　細胞上清/組織勻漿?：離心后取上清，分裝保存于-20℃?。

　　禁用NaN3?：會抑制HRP酶活性?。

　　四、?操作步驟?

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說明書梯度稀釋(如4000→62.5pg/ml)，設(shè)復(fù)孔?。

　　加樣?：每孔加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本100μl，37℃孵育120分鐘?。

　　洗滌?：拍干后加洗滌液浸泡1-2分鐘，重復(fù)4-6次?。

　　顯色?：加TMB工作液100μl，37℃避光反應(yīng)15-30分鐘?。

　　終止與檢測?：加終止液50μl，30分鐘內(nèi)測450nm OD值?。

　　五、?結(jié)果計算?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，計算樣本濃度?。

　　靈敏度?：檢測限通常為30-45.8pg/ml?。

　　重復(fù)性?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%?。

　　六、?注意事項?

　　質(zhì)量控制?：每次實驗需做標(biāo)準(zhǔn)曲線及空白對照?。

　　密封保存?：開封板條需干燥密封，避免受潮?。

　　溫度控制?：試劑盒保存于2-8℃，避免凍存酶標(biāo)試劑?。

　　僅限科研?：不可用于臨床診斷?。

　　以上步驟需嚴(yán)格遵循試劑盒說明書，不同品牌可能存在細節(jié)差異?。

　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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