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PCR系列
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產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱(chēng)
產(chǎn)品編號(hào)
規(guī)格
Profusion™ DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶
HRF0085
100 U
HRF0086
500 U
HRF0087
1000 U
產(chǎn)品描述
Profusion™ DNA Polymerase 是一款超高保真 DNA 聚合酶，其采用蛋白融合技術(shù)且具有通用引物退火功能。它是一款融合到持續(xù)合成能力增強(qiáng)域的火球菌屬樣校正 DNA 聚合酶，使 Profusion™ DNA 聚合酶產(chǎn)生具有高準(zhǔn)確度、靈敏度和抑制劑耐受性的 PCR 序列。 該酶具有 5’→3’DNA 聚合酶活性和 3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是 Taq DNA 聚合酶的 100倍。 酶溶液中添加了延伸因子使得該酶具有長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力，擴(kuò)增速度達(dá)到 15-30sec/kb ，擴(kuò)增目的片段的長(zhǎng)度可長(zhǎng)達(dá) 20 kb。本產(chǎn)品配備了優(yōu)化緩沖液，添加了 PCR 增強(qiáng)組分，使得該酶適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
產(chǎn)品組分
組分名稱(chēng)
（100 U）
（500 U）
（1000 U）
Profusion™ DNA Polymerase (2 U/μL）
50 μL
250 μL
250 μL×2
2×Profusion™ PCR buffer （含 Mg2+ ）
1 mL×3
1 mL×15
1 mL×30
10mM dNTP
100 μL
500 μL
1000 μL
6×DNA loading buffer
1 mL
1 mL×5
1 mL×10
產(chǎn)品應(yīng)用
1.高保真 PCR
2.基因克隆
3.生成測(cè)序模板
4.高 GC 含量 PCR
5.長(zhǎng)片段 PCR（長(zhǎng)達(dá) 20 kb）
6.突變
7.高通量 PCR
活性定義
用活性化的大馬哈魚(yú)精子 DNA 為模板/引物， 74℃ ，30 min 內(nèi)，攝入 10 nmol 的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為 1 U。
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期1年。
DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶
推薦PCR反應(yīng)體系（冰盒上配制）
組分
體積（μL）
終濃度
ddH2O
to 50 μL
-
25 μL
1×
1uL
0.2mM
DNA 模板
適量
Primer 正向 (10 μM)
2.5 μL
0.5 μM
Primer 反向 (10 μM)
Profusion™ DNA Polymerase (2 U/μL)
0.5 μL
1 U/50 μL
【注】
1）試劑使用：使用前請(qǐng)充分融解和混勻。
2）聚合酶濃度：推薦使用 1 U/50 μL，可以在 0.5-2 U/50 μL 之間進(jìn)行優(yōu)化，不要超過(guò)2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：高保真酶有 3’→5’外切酶活性，可能會(huì)降解引物，配制反應(yīng)體系時(shí)，酶應(yīng)該在最后添加。
4）Mg2+終濃度： 體系終濃度為 1.5 mM。如有特殊需要，可用 50 mM MgCl2，以 0.2-0.5 mM 為間隔向上摸索。
5）高 GC 模板： 高GC含量的片段擴(kuò)增時(shí)，體系中加入終濃度為 3%的 DMSO 有利于擴(kuò)增，可明顯的提高擴(kuò)增的效率。
不同模板的推薦使用量（50 μL 反應(yīng)體系）：
模板種類(lèi)
擴(kuò)增片段1kb-10kb
基因組 DNA
50 ng-250 ng
質(zhì)?；虿《?DNA
1pg-10 ng
cDNA
1-5 μL (不超過(guò) PCR 反應(yīng)總體積的10%)
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