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蛋白與免疫
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產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號(hào)
規(guī)格
價(jià)格(元)
BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒)
HRX0119
500T
288
HRX0120
2500T
818
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品是一種即用型的總蛋白濃度測(cè)定試劑盒,由一系列確定濃度的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液組成。BCA試劑盒可通過(guò)測(cè)量562nm處的吸光度并與蛋白標(biāo)準(zhǔn)物的吸光度-濃度曲線進(jìn)行比較,快速測(cè)定總蛋白濃度。蛋白質(zhì)定量過(guò)程可以在45分鐘內(nèi)完成。 該產(chǎn)品基于BCA (Bicin -choninic Acid) 法研制而成,實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測(cè)定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物。同時(shí)將Cu2+還原成Cu+。該測(cè)定法的紫色反應(yīng)產(chǎn)物是由兩個(gè)BCA分子與一個(gè)亞銅離子螯合形成的。 這種水溶性復(fù)合物在562nm處表現(xiàn)出很強(qiáng)的吸光度,在較寬的工作范圍 (20-2,000μg/ ml) 中, 隨著蛋白質(zhì)濃度的增加,吸光度幾乎呈線性。 BCA方法不是真正的端點(diǎn)方法,也就是說(shuō)最終顏色會(huì)繼續(xù)變化。但是孵育后顏色變化的速度足夠慢可以允許分析大量的樣品。據(jù)報(bào)道蛋白質(zhì)的大分子結(jié)構(gòu),肽鍵的數(shù)量以及四種特定氨基酸 (半g氨酸、g氨酸、s氨酸和l氨酸) 的存在與BCA的顏色形成有關(guān)。對(duì)二肽、三肽和四肽的研究表明顏色形成的程度不僅僅是由單個(gè)產(chǎn)生顏色的官能團(tuán)的總和引起的。 因此通常參考諸如牛血清白蛋白 (BSA) 的常見(jiàn)蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)確定待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。一系列確定濃度的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測(cè)物一起進(jìn)行測(cè)定,然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定每個(gè)待測(cè)物的濃度。如果需要精確定量待測(cè)蛋白質(zhì),建議選擇質(zhì)量與待測(cè)蛋白質(zhì)相似的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品。例如在測(cè)定免疫球蛋白樣品時(shí),可以使用牛γ球蛋白 (BGG) 標(biāo)準(zhǔn)品。在介紹的兩種檢測(cè)法中,其中試管檢測(cè)法需要更大體積 (0.1mL) 的蛋白質(zhì)樣品,但是由于它使用的樣品與工作試劑之比為1:20 (v / v),因此干擾物質(zhì)的影響降至低。
產(chǎn)品特性
A.試管配制
1.以50:1的比例混合BCA試劑A和BCA試劑B。即將50ml BCA試劑A與1ml BCA試劑B混合。注意: 使用以下公式確定所需工作試劑的總量: (標(biāo)準(zhǔn)品+待測(cè)樣品) x (重復(fù)次數(shù)) x (每個(gè)樣品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液總體積。 2.將100μL每種標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白質(zhì)分別添加到單獨(dú)的標(biāo)記好的試管中,如表1。
表1:白蛋白(BSA)標(biāo)準(zhǔn)品
孔編號(hào)
A
B
C
D
E
F
G
H
I
添加物
標(biāo)準(zhǔn)品①
標(biāo)準(zhǔn)品②
標(biāo)準(zhǔn)品③
標(biāo)準(zhǔn)品④
標(biāo)準(zhǔn)品⑤
標(biāo)準(zhǔn)品⑥
標(biāo)準(zhǔn)品⑦
標(biāo)準(zhǔn)品⑧
標(biāo)準(zhǔn)品⑨
體積(μL)
100
BSA終濃度(μg/mL)
0
25
125
250
500
750
1000
1500
2000
3.在每個(gè)試管中加入2 ml BCA工作試劑并充分混合。 4.在37°C下孵育30分鐘。 注意:增加孵育時(shí)間和溫度會(huì)增加每次測(cè)試的凈562 nm吸光度, 并同時(shí)降低試劑盒的低檢測(cè)水平和試范圍. 5.將所有管子冷卻到室溫(RT)。 6.將分光光度計(jì)的波長(zhǎng)設(shè)置為OD 562nm。用水將儀器校準(zhǔn)為零。隨后在10分鐘內(nèi)測(cè)量所有樣品的吸光度。 注意: 即使冷卻至室溫后,色彩仍會(huì)繼續(xù)顯影。但是,如果所有吸光度測(cè)量均在10分鐘內(nèi)進(jìn)行,則隨后在RT處的顯影太弱而不會(huì)產(chǎn)生明顯的誤差。 7.從所有讀數(shù)中減去空白的OD562。 8.繪制BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線: OD562 (Y軸) vs BSA標(biāo)準(zhǔn)濃度 (X軸)。 使用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定每個(gè)待測(cè)樣品的蛋白質(zhì)濃度。
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