Hygromycin B 潮霉素B 1g 10g 50g

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

  潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動物真核細胞。

 大腸桿菌（ Escherichia coli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記，用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (Geneticin^TM)，Zeocin和Blasticidin S聯(lián)合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅(qū)蟲功能。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20℃干燥保存，有效期2年。

注意事項

1. 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.之外，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3.本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法

1. 儲存液的配制（50 mg/mL）

稱取0.5 g 潮霉素B加入10 mL 1×PBS，PH 7.4，充分溶解后用0.22 μm濾器過濾除菌，分裝成單次使用的小量（如1 mL）放到-20℃凍存，1年穩(wěn)定。

2. 常用篩選濃度

潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。一般而言，哺乳動物細胞：50-500 μg/mL；細菌/植物細胞：20-200 μg/mL；真菌：300-1000μg/mL。

3. 殺滅曲線的建立

【注意事項】：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線來實現(xiàn)，建議至少選擇5個濃度。

1）第一天：未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜。
【注】：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）根據(jù)細胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000 μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/mL，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

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